Kitul de extracție și amplificare a culturilor OMG

Adecvat în special pentru extracția culturilor modificate genetic și pentru detectarea transgenică a PCR.

Kitul de extracție și amplificare a culturilor OMG este dezvoltat special pentru detectarea prin PCR a culturilor OMG. Tamponul unic de liză conținut în partea A a trusei poate liza în mod specific țesuturile culturilor principale - grâu, porumb, orez, bumbac și soia, pentru a elibera componente conexe, cum ar fi acizii nucleici și proteinele. Extracția fenol / cloroform combinată cu RNaza specifică poate purifica ADN genomic de înaltă puritate fără impurități precum ARN, proteine ​​și ioni metalici. ADN-ul purificat poate fi aplicat în detectarea ulterioară a PCR. Partea B a kitului este un sistem de reacție PCR simplu cu două componente care conține 2 × tampon PCR GMO și ADN polimerază OMG. ADN polimeraza OMG este o polimerază termostabilă modificată cu anticorpi. Tamponul 2 × GMO PCR conține diferite componente, cum ar fi MgCl2, dNTP, stabilizator de reacție PCR, optimizator și amplificator la o concentrație de 2 × OMG. Are avantajele unei funcționări rapide și simple, sensibilitate ridicată, specificitate puternică, stabilitate bună etc. Poate fi utilizat în combinație cu partea A pentru detectarea transgenică PCR a culturilor OMG.

Pisică. Nu Dimensiunea de ambalare
4992905 200 rxn

 

 


Detaliile produsului

Exemplu experimental

FAQ

Etichete de produs

Caracteristici

■ Aplicabilitate largă: Acest kit poate extrage ADN genomic de înaltă calitate din cinci culturi OMG majore.
■ Simplu și rapid: extracția ADN genomică a culturilor OMG poate fi finalizată în decurs de 2 ore. Nu este nevoie de centrifuge mari refrigerate, cerințe scăzute pentru instrumente și echipamente. Potrivit pentru extragerea rapidă a ADN genomic a culturilor OMG la toate nivelurile instituțiilor de cercetare.
■ Eficiență și specificitate ridicate: tamponul unic al polimerazei Taq modificate cu anticorpi asigură o amplificare eficientă a polimerazei, care este mai specifică decât polimeraza Taq normală.

Aplicații

Trusa poate extrage ADN genomic de înaltă calitate din culturile OMG majore, cum ar fi grâul, porumbul, orezul, bumbacul și soia și poate efectua detectarea transgenică a PCR pe culturile OMG.

Toate produsele pot fi personalizate pentru ODM / OEM. Pentru detalii,vă rugăm să faceți clic pe Serviciu personalizat (ODM / OEM)


  • Anterior:
  • Următorul:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Extracția ADN genomic
    Extracția ADN genomic a fost efectuată pe frunze de orez, porumb, soia, bumbac și respectiv grâu de 100 mg. Experimentul a fost repetat de două ori. S-au încărcat 3 pl ADN din totalul de 100 pl eluenți pe bandă.
    Concentrația gelului de agaroză a fost de 2%. Electroforeza a fost efectuată sub 6 V / cm timp de 20 de minute.
    D15000: Marker ADN TIANGEN D15000.
    Experimental Example Detectare PCR
    ADN-ul genomic al orezului, porumbului, soia, bumbacului și respectiv grâului a fost amplificat. Experimentul a fost repetat de două ori. La fiecare bandă s-au încărcat 6 pl din totalul sistemului de reacție de 20 pl.
    Concentrația gelului de agaroză a fost de 2%. Electroforeza a fost efectuată sub 6 V / cm timp de 20 de minute.
    D15000: Marker ADN TIANGEN D15000.
    Î: Fără benzi de amplificare

    Șablon A-1

    ■ Șablonul conține impurități proteice sau inhibitori Taq etc. —— Purificați șablonul ADN, eliminați impuritățile proteice sau extrageți ADN șablon cu kituri de purificare.

    ■ Denaturarea șablonului nu este completă - Creșteți corespunzător temperatura de denaturare și prelungiți timpul de denaturare.

    ■ Degradarea șablonului - Pregătiți din nou șablonul.

    A-2 Grund

    ■ Calitatea slabă a primerilor —— Re-sintetizați primerul.

    ■ Degradarea primerului ——Aliquot primerii cu concentrație mare în volum mic pentru conservare. Evitați înghețarea și dezghețarea multiplă sau crioconservarea pe termen lung de 4 ° C.

    ■ Proiectarea necorespunzătoare a grundurilor (de exemplu, lungimea grundului nu este suficientă, dimerul format între grunduri etc.) -Grunduri de reproiectare (evita formarea dimerului grundului și a structurii secundare)

    A-3 Mg2+concentraţie

    ■ Mg2+ concentrația este prea mică ——Măriți în mod corespunzător Mg2+ concentrație: Optimizați Mg2+ concentrație printr-o serie de reacții de la 1 mM la 3 mM cu un interval de 0,5 mM pentru a determina Mg optim2+ concentrația pentru fiecare șablon și grund.

    A-4 Temperatura de recoacere

    ■ Temperatura ridicată de recoacere afectează legarea grundului și șablonului. —— Reduceți temperatura de recoacere și optimizați starea cu un gradient de 2 ° C.

    A-5 Timp de prelungire

    ■ Timp scurt de prelungire —— Măriți timpul de prelungire.

    Î: Fals pozitiv

    Fenomene: eșantioanele negative arată, de asemenea, benzile secvenței țintă.

    A-1 Contaminarea PCR

    ■ Contaminarea încrucișată a secvenței țintă sau a produselor de amplificare —— Nu pipetați cu atenție proba care conține secvența țintă în eșantionul negativ sau vărsați-le din tubul centrifugii. Reactivii sau echipamentele ar trebui să fie autoclavizate pentru a elimina acizii nucleici existenți, iar existența contaminării ar trebui determinată prin experimente de control negativ.

    ■ Contaminarea reactivului ——Alocați reactivii și depozitați la temperatură scăzută.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ concentrația este prea mică ——Măriți în mod corespunzător Mg2+ concentrație: Optimizați Mg2+ concentrație printr-o serie de reacții de la 1 mM la 3 mM cu un interval de 0,5 mM pentru a determina Mg optim2+ concentrația pentru fiecare șablon și grund.

    ■ Proiectarea necorespunzătoare a primerului, iar secvența țintă are omologie cu secvența non-țintă. —— Grunduri de reproiectare.

    Î: Amplificare nespecifică

    Fenomene: benzile de amplificare PCR sunt incompatibile cu dimensiunea așteptată, fie mare, fie mică, sau uneori apar ambele benzi de amplificare specifice și benzi de amplificare nespecifice.

    A-1 Primer

    ■ Specificitate slabă a primerului

    —— Grund pentru reproiectare.

    ■ Concentrația grundului este prea mare ——Măriți în mod corespunzător temperatura de denaturare și prelungiți timpul de denaturare.

    A-2 Mg2+ concentraţie

    ■ Mg2+ concentrația este prea mare —— Reduceți în mod corespunzător concentrația de Mg2 +: Optimizați Mg2+ concentrație printr-o serie de reacții de la 1 mM la 3 mM cu un interval de 0,5 mM pentru a determina Mg optim2+ concentrația pentru fiecare șablon și grund.

    A-3 Polimerază termostabilă

    ■ Cantitate excesivă de enzime —— Reduceți cantitatea enzimatică în mod adecvat la intervale de 0,5 U.

    A-4 Temperatura de recoacere

    ■ Temperatura de recoacere este prea scăzută ——Măriți corespunzător temperatura de recoacere sau adoptați metoda de recoacere în două etape

    A-5 cicluri PCR

    ■ Prea multe cicluri PCR —— Reduceți numărul de cicluri PCR.

    Î: Benzi neuniforme sau cu frotiuri

    A-1 Primer—— Specificitate slabă —— Re-proiectați grundul, schimbați poziția și lungimea grundului pentru a spori specificitatea acestuia; sau efectuați PCR imbricat.

    A-2 Șablon ADN

    —— Șablonul nu este pur —— Purificați șablonul sau extrageți ADN cu kituri de purificare.

    A-3 Mg2+ concentraţie

    ——Mg2+ concentrația este prea mare —— Reduceți în mod corespunzător Mg2+ concentrație: Optimizați Mg2+ concentrație printr-o serie de reacții de la 1 mM la 3 mM cu un interval de 0,5 mM pentru a determina Mg optim2+ concentrația pentru fiecare șablon și grund.

    A-4 dNTP

    ——Concentrația de dNTP este prea mare —— Reduceți în mod corespunzător concentrația de dNTP

    A-5 Temperatura de recoacere

    ——Temperatura prea scăzută de recoacere ——Măriți corespunzător temperatura de recoacere

    A-6 Cicluri

    ——Prea multe cicluri ——Optimizați numărul ciclului

    Î: Cât ADN șablon trebuie adăugat într-un sistem de reacție PCR de 50 μl?
    ytry
    Î: Cum se amplifică fragmente lungi?

    Primul pas este alegerea polimerazei adecvate. Polimeraza Taq regulată nu poate fi corectată din cauza lipsei activității de exonuclează 3'-5 'și nepotrivirea va reduce considerabil eficiența extensiei fragmentelor. Prin urmare, polimeraza Taq obișnuită nu poate amplifica în mod eficient fragmente țintă mai mari de 5 kb. Taq polimeraza cu modificări speciale sau altă polimerază de înaltă fidelitate ar trebui selectată pentru a îmbunătăți eficiența extensiei și pentru a satisface nevoile de amplificare a fragmentelor lungi. În plus, amplificarea fragmentelor lungi necesită, de asemenea, ajustarea corespunzătoare a designului primerului, timpul de denaturare, timpul de extindere, pH-ul tampon etc. De obicei, primerii cu 18-24 bp pot duce la un randament mai bun. Pentru a preveni deteriorarea șablonului, timpul de denaturare la 94 ° C ar trebui redus la 30 sec sau mai puțin pe ciclu, iar timpul de creștere a temperaturii la 94 ° C înainte de amplificare ar trebui să fie mai mic de 1 min. Mai mult, setarea temperaturii de extindere la aproximativ 68 ° C și proiectarea timpului de extindere în funcție de rata de 1 kb / min poate asigura o amplificare eficientă a fragmentelor lungi.

    Î: Cum se îmbunătățește fidelitatea de amplificare a PCR?

    Rata de eroare a amplificării PCR poate fi redusă utilizând diverse ADN polimeraze cu fidelitate ridicată. Dintre toate ADN polimerazele Taq găsite până acum, enzima Pfu are cea mai mică rată de eroare și cea mai mare fidelitate (vezi tabelul atașat). În plus față de selecția enzimei, cercetătorii pot reduce în continuare rata de mutație a PCR prin optimizarea condițiilor de reacție, inclusiv optimizarea compoziției tampon, concentrația polimerazei termostabile și optimizarea numărului ciclului PCR.

    Scrieți mesajul dvs. aici și trimiteți-l nouă